Определение отцовства - описание методов

Установление отцовства предполагает проведение серии процедур, которые направлены на определение родственной связи между ребенком и мужчиной, предположительно являющимся его биологическим отцом.

Медицина оперирует несколькими основными методиками определения отцовства. Они различаются по технике проведения и степени сложности, по материалам, которые используются в процессе, и конечно, по достоверности полученных результатов. Как правило, исследования, связанные с установлением отцовства, проводят врачи-генетики. При этом они применяют следующие методы:

• по дате зачатия и сроку беременности;
• по внешним признакам;
• по группе крови;
• по анализу ДНК.

Определение отцовства по дате зачатия и срокам беременности

По дате зачатия

Зачастую, в том случае, если в течение одного менструального цикла женщина вступала в половую связь с несколькими мужчинами, возникает необходимость установления отцовства. В таких ситуациях, с целью предварительного и весьма неточного определения отцовства, можно попробовать вычислить конкретную дату, на которую пришелся максимальный шанс зачатия. Соответственно, мужчина, бывший в половой связи с женщиной незадолго после, или до этой даты, имеет высокую вероятность оказаться отцом ребенка.

Известно, что если у женщины менструальный цикл регулярен, то максимальная вероятность зачатия возникает в середине менструального цикла, примерно на 14-15 день от начала очередных месячных. Но как показывают практические наблюдения, момент максимальной вероятности зачатия у многих женщин точно определить достаточно трудно.

Установление отцовства при помощи сопоставления возможной даты зачатия и даты половой связи может оказаться неверным еще по одной причине. Дело в том, что сперматозоиды могут сохранять свою активность и способность к оплодотворению в женском организме на протяжении 3-5 дней после полового акта. А это означает, что зачатие могло произойти и через несколько дней после половой связи. В таком случае отцом ребенка может оказаться мужчина, имевший половой акт с женщиной еще за несколько дней до оптимальной для зачатия даты. Подобная ситуация возможна даже в том случае, если у женщины был секс непосредственно в дату зачатия с другим мужчиной.

По сроку беременности

Установление отцовства возможно и при помощи определения срока беременности, который может быть примерно измерен согласно показаниям ультразвукового исследования. Однако даже наиболее совершенная УЗИ-аппаратура не способна установить дату зачатия с высокой точностью, и указать на конкретную дату.

Таким образом, установление отцовства на основе определения возможной даты зачатия или измерения срока беременности, является крайне приблизительным и недостоверным методом. Оно может иметь только дополняющее значение. Кроме того, данная методика становится практически бесполезной в случае, если женщина в течение небольшого промежутка времени имела половые контакты с различными партнерами.

Определение отцовства по внешним признакам

Различные элементы внешности человека, такие как цвет волос, глаз или кожи, сходство в чертах лица и т.д., могут служить только косвенным, и очень ненадежным поводом для опровержения либо подтверждения отцовства.

Объясняется это тем, что, хоть внешние признаки и задаются генетически, но при этом способны варьироваться в широких пределах и иметь разную степень проявления в каждом конкретном случае. Кроме того, несостоятельность метода установления отцовства на основе внешнего сходства мужчины и ребенка подтверждается фактом существования двойников. Так называются люди, которые не имеют никаких родственных связей, но при этом очень похожи друг на друга своей внешностью.

Определение отцовства по группе крови

В человеческой популяции насчитывается более 20 различных систем групп крови. Наиболее часто используются только две из них:
1. Система AB0. Чаще всего именно эту систему имеют в виду, когда говорят о "группе крови".
2. Rh-фактор. Различия по резус-фактору крови.

Обе эти системы разделения крови по группам задаются генетически и, следовательно, открывают некоторые возможности для определения отцовства. Сам принцип установления отцовства по резус-фактору и группе крови основан на том, что параметры крови ребенка зависят от набора генов, которые передадут ему мать и отец.

Система АВ0

В этой системе выделяют 4 группы крови:

• I или 0 (нулевая);
• II – A;
• III – B;
• IV – AB.

Их различие определяется нахождением в крови человека антител (веществ, которые вырабатываются иммунной системой) того или иного вида. Соответственно, в крови у человека с I группой оба вида антител отсутствуют, у человека со II группой – есть только антитела А, с III – только В, а с IV – оба вида антител.

Определение отцовства на основе группы крови не может считаться точным способом, хотя и имеет большую достоверность, чем описанные выше. Данная методика считается скорее индикативной, и применяется в качестве скринингового предварительного исследования перед проведением ДНК-теста. Анализ крови предоставляет неопровержимые доказательства только в редких случаях. Например, если у ребенка I группа крови, а у отца – IV.

Rh-фактор

Согласно системе Rh-факторов, выделяют только две группы – резус-отрицательную (Rh-) и резус-положительную (Rh+). Соответственно, их различие состоит в наличии или отсутствии специфических антител (резус-фактора) в крови человека.

Установление отцовства по резус-фактору является менее достоверным, чем на основе системы АВ0. Даже у резус-положительных родителей может родиться ребенок с резус-отрицательной кровью. Однако у резус-отрицательных родителей ребенок также всегда будет иметь отрицательный резус-фактор. Поэтому единственный случай, когда можно однозначно утверждать, что мужчина не является биологическим отцом ребенка, возникает в ситуации, когда оба родителя имеют отрицательный резус-фактор, а ребенок – положительный.

Определение отцовства по группе крови служит предварительным методом для оценки наличия кровного родства между ребенком и мужчиной. Особенность данного метода заключена в том, что отрицательный результат будет точен на 99%, а положительный практически не является значимым. Кроме того, данный анализ можно провести только после рождения ребенка, когда появляется возможность исследовать его группу крови.

Определение отцовства по ДНК

Иногда в жизни возникают такие ситуации, когда необходима установка степени родства людей с достаточной степенью достоверности. Сюда относятся случаи, которые связаны с воссоединением семейства, решением различных юридических проблем, исследованием совместимости тканей и т.д. Всего несколько десятилетий назад такая задача решалась с огромными трудностями и крайне сомнительной достоверностью результатов. Но после того, как биологи научились расшифровывать код ДНК, были созданы методы генетических исследований, позволяющие с высокой точностью ответить на вопрос, присутствует ли биологическое родство между двумя людьми. В том числе подобные технологии применяются и при определении отцовства.

Почему мы все разные, и почему похожи на своих родителей?

Каждый человек несет в себе совершенно уникальную генетическую информацию. Она закодирована в ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоте). Эти гигантские молекулы присутствуют в любой клетке человеческого организма, имеющей ядро. Молекулы ДНК организованы в сложные структуры, получившие название хромосом.

Каждая из хромосом содержится в каждой из соматических клеток в двух экземплярах. Греческое слово "сома" означает "тело", поэтому соматическими называются клетки, которые составляют тело человека. Единственным исключением – несоматическими клетками – являются клетки половые: сперматозоиды у мужчин и яйцеклетки у женщин. От соматических они отличаются тем, что в них все хромосомы содержатся не парами, а только в единственном числе.

Зачем же природа предусмотрела такое различие? Как известно, при зачатии происходит слияние сперматозоида с яйцеклеткой и объединение их хромосомного набора, то есть генетического материала, который в них содержится. Одну хромосому из каждой пары ребенок получает от отца (хромосома сперматозоида), а вторую – от матери (хромосома яйцеклетки). Таким путем ребенок получает полный хромосомный набор, и наследует генный материал своих родителей – поэтому он зачастую на них похож. Но с другой стороны, комбинации мужских и женских хромосом могут сложиться миллиардами различных вариантов – именно это определяет индивидуальность каждого человека.

ДНК-анализ на определение отцовства

Данный метод основан как раз на этой двойственности ДНК ребенка: с одной стороны она по-своему уникальна, с другой – возникла в результате комбинации частей материнской и отцовской ДНК. Современные технологии молекулярно-генетических исследований позволяют врачам выявлять материнскую и отцовскую составляющие ДНК у любого человека. Кроме того, имеется возможность проследить передачу определенных фрагментов ДНК в парах мать-ребенок или отец-ребенок. Ведь в случае подтверждения родства, фрагменты ДНК в сравниваемых парах совпадают практически полностью.

Юридическое значение

ДНК-тест на определение отцовства считается настолько достоверным, что его результаты имею даже официальную юридическую силу. Согласно Приказу Министерства Здравоохранения, для доказательств факта отцовства достаточно проведения исследования с точностью результатов 99,90%. Современные технологии позволяют достигать еще большей точности, но чаще всего в этом просто нет необходимости. Корректно подсчитанная вероятность отцовства, равная 99,90%, вполне достаточна для использования формулировки, принятой в научном мире и юридической практике: "отцовство практически доказано".

Исключение факта отцовства для признания его юридически значимым требует получения как минимум трех несовпадений между исследуемыми фрагментами ДНК ребенка и его предполагаемого отца.

Следует помнить, что без материала, взятого от матери ребенка, достичь уровня необходимой достоверности исследования сложнее, чем в случае проведения тестирования всех членов семьи. Именно поэтому, если ДНК-экспертиза выполняется с целью оспаривания или определения отцовства в судебном порядке, то судьи зачастую настаивают на одновременном заборе материалов от ребенка, его предполагаемого отца и биологической матери. Это необходимо для того, чтобы заключение, выданное судебно-медицинским экспертом, не вызывало никаких сомнений.

Определение отцовства при помощи исследования молекул ДНК – возможность получить совершенно достоверный и научно обоснованный результат. Это заключение может стать важным аргументом в решении множества юридических проблем, например, при бракоразводных процессах и взыскании алиментов, определении наследников и распределении наследства, в иммиграционных и многих других вопросах.

Как формулируется заключение при ДНК-анализе на определение отцовства?

После проведения ДНК-анализа для установления отцовства выдается заключение, содержащее один из следующих выводов:
1. Результат положительный – мужчина НЕ ИСКЛЮЧЕН как биологический отец данного ребенка (вероятность отцовства составляет 99,9%).
2. Результат отрицательный – мужчина ИСКЛЮЧЕН как биологический отец данного ребенка (вероятность отцовства исключена на 100%).

Теоретически возможно существование в мире другого человека с генетическим набором, абсолютно идентичным генетическому паспорту тестируемого. Например, такая ситуация наблюдается у однояйцевых близнецов, чей генный материал соответствует друг другу на все 100%. С этой вероятностью и связано небольшое отклонение от полностью достоверного положительного результата при тесте ДНК на отцовство. Но, в подавляющем большинстве случаев, установление отцовства с вероятностью в 99,9% будет означать его доказанность. А отрицательный результат при корректном заборе материала и правильном проведении исследования всегда однозначно верен.

Какие биологические материалы можно использовать при ДНК-анализе на определение отцовства?

Молекулы ДНК могут быть выделены из множества разных источников. Ранее для определения отцовства по ДНК использовали исключительно кровь, взятую из вены. Однако такие образцы крови должны отбираться только квалифицированным медицинским работником, причем в условиях стационара или, как минимум, поликлиники. Для многих клиентов, а в особенности для детей, подобный метод не всегда является приемлемым. На сегодняшний день диапазон материалов для проведения исследований ДНК чрезвычайно расширился. Теперь есть возможность выполнять ДНК-анализ не только по крови из вены, но и по волосам, слюне, ногтям и т.д.

Щечный эпителий

На данный момент наиболее предпочтительным, легким и распространенным методом забора эталонного образца для исследования является использование щечного (буккального) мазка. При этом для проведения генетического анализа используются эпителиальные клетки слизистой оболочки ротовой полости, которые берутся на внутренней стороне щеки с помощью ватной палочки. Это неинвазивный (то есть, не травмирующий ткани организма) и абсолютно безболезненный метод, при котором забор материала занимает около минуты. Кроме того, он не требует присутствия медицинских работников, и может быть выполнен самим пациентом в то время, когда ему будет удобно, даже не выходя из дома. Также использование щечного эпителия снижает вероятность загрязнения материала для анализа.

Тест ДНК на определение отцовства по нестандартным образцам

Если взятие щечного эпителия не представляется возможным или затруднено, то можно воспользоваться другими методами. В качестве источника ДНК при выполнении частных и анонимных исследований, кроме стандартного образца буккального эпителия, могут быть использованы практически любые объекты, содержащие ДНК человека:

• образцы крови;
• слюна;
• зубы;
• ногти;
• сперма;
• образцы из хранилища биопсии тканей;
• волосы с корнем и другие подходящие биологические ткани.

Обнаружить подобные образцы, на которых остались следы ДНК человека, чаще всего можно на его личных вещах:

• зубных щетках;
• лезвии бритвы;
• окурках сигарет;
• носовых платках;
• салфетках;
• одежде и т.д.

Необходимо учитывать, что анализ ДНК по нестандартным образцам потребует соблюдения некоторых обязательных условий, применения более сложных технологий, а иногда и специального оборудования. Например, для определения отцовства по волосам нужно помнить, что для исследования не подходят подстриженные волосы. Использовать необходимо только те волосы, на которых сохранилась луковица, поскольку именно в ней и содержится ДНК, по которой будет проводиться анализ. Количество таких волос с луковицами должно составлять не менее 5-6 штук.

Кроме того, несмотря на применение самых современных методов генетической экспертизы, выделить ДНК из таких нестандартных образцов в некоторых случаях невозможно по причине ее полного отсутствия.

Проведение ДНК-анализа на определение отцовства

Контрольный образец ткани проходит тщательный анализ для создания ДНК-профиля человека. Впоследствии этот ДНК-профиль сравнивается с другим образцом с целью выявления генетического сходства.

Полимеразная цепная реакция

Для создания ДНК-профиля человека недостаточно просто выделить дезоксирибонуклеиновую кислоту из предоставленного материала. Исследование будет успешным только в том случае, если молекул ДНК будет достаточное, то есть довольно большое количество. С этой целью используется процесс, называемый цепной полимеразной реакцией. В ходе этой реакции происходит умножение или амплификация образца ДНК, который был выделен из исходного материала. В итоге получается несколько миллиардов абсолютно точных копий одной и той же ДНК, полученной от человека. С этим количеством молекул ДНК уже работают генетики.

Исследование локусов

Локусом ДНК называется ее строго определенная часть, которая подвергается исследованию и сравнению. 99,9% из последовательностей, встречающихся в ДНК человека, совпадают по своему составу, но, тем не менее, ДНК различных людей несут в себе достаточное количество индивидуальных отличий. Существуют такие участки молекулы ДНК, которые являются уникальными для каждого человека. Именно этот факт определяет отличия между нами.

На точность ДНК-анализа, в первую очередь, влияет количество изучаемых генетических локусов. Чем большее количество участков, определяющих нашу уникальность, будет исследовано, тем выше вероятность опровержения или подтверждения отцовства. В настоящее время на каждом образце ДНК принято анализировать от 16 до 40 различных локусов. Это обеспечивает достоверность более 99.99% при подтверждении биологического отцовства, и 100% результат при его исключении. Кроме того, зачастую анализ проводится двумя независимыми группами исследователей, а полученные данные впоследствии сверяются. Такая процедура позволяет избежать ошибок, связанных со случайными загрязнениями материала, или неточностями при работе с ним.

Определение отцовства во время беременности

Установление отцовства еще на ранних сроках беременности традиционно относится к пренатальной диагностике. Чтобы определить отцовство во время беременности, вначале необходимо осуществить забор биологического материала от плода. Данную процедуру строго рекомендуется проводить только в профильном медицинском учреждении, поскольку она может быть сопряжена с возможными рисками возникновения осложнений.

В той ситуации, когда отцовство необходимо определить еще до рождения ребенка, применяется ДНК-тестирование на основании биологических материалов плода, получение которых происходит следующим образом:

• Биопсия ворсинок хориона. Забор материала осуществляется на сроке от 9 до 12 недель беременности. С целью получения биологического материала специалист под контролем ультразвукового аппарата, через переднюю стенку живота или влагалище, вводит иглу, достигая оболочки плода. Шанс прерывания беременности в процессе проведения данной процедуры составляет около 2%.
• Амниоцентез. Процедура получения околоплодных вод (амниотической жидкости) для последующего генетического исследования. Амниоцентез чаще всего проводится на сроке от 14 до 20 недель беременности. Процедура отбора амниотической жидкости осуществляется специалистом-гинекологом. Он, под контролем УЗИ-аппарата, через ткани передней брюшной стенки вводит тонкую и длинную иглу, проникает через стенку матки, и набирает необходимое для исследования количество околоплодных вод. Шанс развития осложнений или спонтанного прерывания беременности в процессе проведения амниоцентеза составляет около 1%.
• Кордоцентез. В процессе кордоцентеза выполняется забор крови плода непосредственно из сосудов пуповины. Осуществляется эта процедура на сроке беременности, превышающем 18-20 недель. Шанс осложнений при применении данного метода составляет менее 1%.

Неинвазивная методика дородового теста на отцовство

По сообщениям американских ученых, они разработали неинвазивный способ определения отцовства в период беременности. Генетическая экспертиза выполняется по специальной методике, в которой анализу подвергается небольшое количество ДНК. Данный тест можно использовать уже в первом триместре, чаще всего после наступления 10 недели беременности. Анализ на более ранних сроках не дает гарантии получения достаточного количества частей ДНК плода из плазмы крови матери. Тестирование проводится путём исследования некоторого количества образцов венозной крови, взятой у будущей матери и у предполагаемого отца.

В технологии дородового неинвазивного определения отцовства применяется исследование свободно циркулирующей ДНК плода. Некоторое ее количество при беременности находится в крови будущей матери. Современные технологии, используемые в генетике, позволяют выделить ее, и подвергнуть сравнению с ДНК матери и возможного биологического отца.

Новый неинвазивный тест на определение отцовства может послужить заменой перечисленным выше небезопасным для здоровья матери и ребенка методам определения ДНК-профиля плода. По сообщениям ученых, он обладает такой же высокой точностью, но является более предпочтительным, поскольку при его проведении не возникает угрозы осложнений и досрочного прерывания беременности.

Заключение

Минимальный срок установления биологического родства и проведения исследования для определения отцовства составляет 3 дня. Однако, в большинстве случаев, для качественного анализа потребуется от десяти дней до двух недель с момента поступления биологических материалов в лабораторию.

На сегодняшний день анализ ДНК может проводиться практически везде. Имеются даже портативные лаборатории. А оборудование для генетической идентификации личности производят десятки предприятий во многих странах мира. Именно поэтому ранее сложная и экзотическая процедура сегодня становится обыденным методом исследования, воспользоваться которым может каждый желающий.